自营Yeasen 试剂 已认证 品牌介绍 上海翊圣生物科技有限公司是一家集研发、生产、销售为一体的高新技术企业。翊圣生物专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供一系列高质量和有绝对价格竞争力的产品，包括分子生物学、免疫学、生物化学和细胞生物学相关的试剂、试剂盒，并提供一系列相关的技术服务。 代理Omega Bio-Tek 试剂/核酸纯化 已认证 品牌介绍 Omega Bio-Tek专门生产核酸纯化试剂盒，可以对不同的来源的样品进行 DNa/RNa 纯化，步骤简单，速度快，价格便宜。自1998年成立，Omega Biotek一直在核酸纯化的前列。公司第二代HiBind®硅胶基质在源频谱核酸分离方面具有极大的灵活性和有效可靠的解决方案。EAZY核酸（EZNA®）系统HiBind®硅膜在从组织、细胞培养、凝胶中回收和净化DNA和RNA方面具有一定优势。公司产品范围从植物中提取RNA纯化DNA提取干血点，覆盖面极广。而Omega Biotek的科研人员一直致力于公司产品范围的扩大，包括基于核酸分离系统的一个新的磁珠。  生命科学研究的不断发展，对核酸和蛋白质纯化技术要求也不断提高。Omega Biotek产品致力与为客户减少样本处理时间，提供高品质的结果。Omega的客户包括：辉瑞公司（Pfizer）、德国拜耳医药（Bayer）、美国国立卫生研究院（NIH）、美国国家癌症研究所（NCI）、美国疾病预防控制中心（US CDC）等等各界著名企业。 代理Sino Biological 抗体/蛋白质/抗原/多肽 已认证 品牌介绍 北京义翘神州科技股份有限公司（Sino Biological Inc.）是一家从事生物试剂研发、生产、销售并提供技术服务的生物科技公司，主要业务包括重组蛋白、抗体、基因和培养基等产品，以及重组蛋白、抗体的开发和生物分析检测等服务。义翘神州为全球的药品研发企业和生命科学研究机构提供高质量的生物试剂产品和高水平的技术服务。公司目前生产和销售的现货产品种类超过 4.6 万种，其中重组蛋白约 6,000 种，包括超过 3,800 种人源细胞表达重组蛋白产品，能够全面满足客户对于最接近人体天然蛋白结构和性质的重组蛋白需求；公司还能提供约 12,000 种抗体，其中单克隆抗体数量约 4,600 种，能够覆盖生命科学研究的多个领域，为分子生物学、细胞生物学、免疫学、发育生物学、干细胞研究等基础科研方向和创新药物研发提供「一站式」生物试剂产品和技术服务。义翘神州的客户涵盖大学、科研院所、医药研发企业等国内外各类生物研发单位。目前公司已经在美国、欧洲建立了子公司，已成为生物试剂行业国内领先的科技公司之一。 代理Abcam 抗体/试剂 已认证 品牌介绍 Abcam公司成立于1998年，位于英国的剑桥科学园，是世界上最有名的抗体供应商之一。Abcam以优质、齐全的产品、完善的网络支持功能和强大的技术支持队伍得到全球客户的认可和赞誉。并在2004年获得了对于生物界公司不可多得的英女王奖，拥有很好的知名度和口碑。 吐血整理外泌体标记大法（附原文献）关键词：PKH-67（Green）/PKH-26（Red）、DiI/DiD/DiO、CFSE/CFDA/Calcein-AM、C5-maleimide-Alexa488/C5-maleimide-Alexa633、活体示踪、量子点标记    Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；参与细胞之间的交流，物质的运输以及正常生理过程的维持，此外还与疾病的产生有关。    对分离的外泌体进行体外标记或活体示踪，有助于对外泌体的功能进行进一步的研究。目前对于外泌体的标记方法有很多种，包括亲脂性的染料和膜渗透型的化合物等。    下面小编就为大家罗列下近几年文献发表中有关外泌体染色的方法。一、亲脂性染料 :PKH-67（green）/PKH-26（red）染料可以稳定的与细胞膜脂质区结合并发出荧光，主要用于细胞体外标记、体外细胞增殖研究以及体内外的细胞失踪研究。PKH67的体内荧光半衰期为10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更长的半衰期，标记在兔红细胞上的PKH26半衰期长达100天以上。特别适用于体外增殖研究以及长期的体内细胞跟踪研究。 将PKH67标记的神经细胞外泌体与b.End3 细胞共培养后的荧光图图片引自：Xu B, Zhang Y, Du X-F, et al. Neurons secrete miR-132-containing exosomes to regulate brain vascular integrity. Cell Research. 2017;27(7):882-897.二、亲脂性羰花青染料（carbocyanine dyes）:DiI/DiD/DiO/DiR   DiI, DiO, DiD, DiR是一系列亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。这些环境敏感性荧光染料在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强。且具有消光系数高、极性依赖性、激发态寿命短等特点。一旦进入细胞膜后，可在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。    下面小编整理了使用这类染料对外泌体进行标记的文献。DiI  将DiI标记的外泌体注射入小鼠海马齿状回（DG）区，分别观察第3、6和20天的荧光，对比可以发现外泌体在皮质层发生了很大的迁移。图片引自：Zheng T, Pu J, Chen Y, et al. Plasma Exosomes Spread and Cluster Around β-Amyloid Plaques in an Animal Model of Alzheimer’s Disease. Frontiers in Aging Neuroscience. 2017;9:12.DiD上图显示的是将DiD标记的外泌体与PC12细胞孵育3H后，用共聚焦观察的结果。图片引自：Tian T, Zhu YL, Zhou YY, Exosome uptake through clathrin-mediated endocytosis and macropinocytosis and mediating miR-21 delivery. J Biol Chem. 2014 Aug 8;289(32):22258-67DiR体内静脉注射DiR标记的外泌体，24H后进行成像观察，结果如上图所示。图片引自：Wiklander OP, Nordin JZ, O\'Loughlin A, et al. Extracellular vesicle in vivo biodistribution is determined by cell source, route of administration and targeting.J Extracell Vesicles. 2015 Apr 20;4:26316.DiO使用ExoChip-chambers捕获不同样品中的exosome，然后使用DiO进行外泌体染色，通过观察荧光的强弱对不同来源样品中的外泌体进行定量分析。图片引自：Kanwar SS, Dunlay CJ, Simeone DM, Nagrath S. Microfluidic device (ExoChip) for On-Chip isolation, quantification and characterization of circulating exosomes. Lab on a chip. 2014;14(11):1891-1900.三、渗透型的化合物标记法：CFSE/CFDA/Calcein-AM1、CFSE：羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯，常称为 CFSE，可被动扩散进入细胞。 这种试剂没有颜色和荧光，直至细胞内的酯酶去除其醋酸盐基团，产生能发出明亮荧光的羧基荧光素琥珀酰亚胺酯。 琥珀酰亚胺酯与细胞内氨基反应，形成稳定且能用醛固定剂固定的荧光偶联物。使用CFSE进行标记的外泌体可以用于后续FACS、NTA和显微镜观察使用。图片引自：van der Vlist EJ1, Nolte-\'t Hoen EN, Stoorvogel W, et.al.Fluorescent labeling of nano-sized vesicles released by cells and subsequent quantitative and qualitative analysis by high-resolution flow cytometry，Nat Protoc. 2012 Jun 14;7(7):1311-26.2、Calcein-AM：在传统的Calcein（钙黄绿素）基础上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基团，增加了疏水性，使其能够轻易穿透活细胞膜。一旦进入细胞后，Calcein-AM（本身不发荧光）被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性分子Calcein，从而被滞留在细胞内并发出强绿色荧光。 上图展示的是通过钙黄绿素染色的方法对获得的外泌体完整性进行检测。如果外泌体完整性很好，发出绿色荧光的钙黄绿素就可以保留在外泌体中，反之，则会从外泌体中泄漏出来。 图片引自：Warren D. Gray, Adam J. Mitchell, Charles D. Searles, An accurate, precise method for general labeling of extracellular vesicles, MethodsX. 2015; 2: 360–367.四、利用外泌体表面的巯基（thiol group）对外泌体进行标记：C5-maleimide-Alexa 488 / C5-maleimide-Alexa 633上图中左图显示的是maleimide-633标记的外泌体与肺成纤维母细胞共培养的结果；右图展示的是EV488标记的外泌体与Hela细胞共培养的结果。图片引自：Roberts-Dalton HD1, Cocks A, Falcon-Perez JM,et al. Fluorescence labelling of extracellular vesicles using a novel thiol-based strategy for quantitative analysis of cellular delivery and intracellular traffic.Nanoscale. 2017 Sep 21;9(36):13693-13706.五、通过物理的方法对外泌体进行标记：1、放射性标记物：99mTc-HMPAO  外泌体标记示意图：将99mTc-HMPAO与外泌体进行孵育，99mTc-HMPAO进入外泌体后被内源的谷胱甘肽转换成亲水的形式，从而滞留在外泌体中，达到标记的目的。右侧是将标记后的外泌体输入小鼠体内后观察到的外泌体分布图。图片引自：Hwang DW, Choi H, Jang SC, et al. Noninvasive imaging of radiolabeled exosome-mimetic nanovesicle using 99mTc-HMPAO. Scientific Reports. 2015;5:15636.2、量子点微囊泡标记：Ag2Se @锰量子点Ag2Se @锰量子点一体化具有优良的近红外（NIR）荧光和磁共振（MR）成像能力，可用于MV体内的高分辨率双模式实时有效的标记跟踪。是一种低毒高灵敏、非侵入性的实时活体成像的方法。Ag2Se @锰量子点是通过控制Mn+与Ag2Se纳米晶体在80℃的NaOH溶液反应制成，其具有约1.8纳米的超小尺寸，良好的水分散性，高NIR荧光量子产率和12.87毫-1-1高纵向弛豫。超小尺寸使他们能够通过电穿孔直接和有效地装入的MV。该方法可以用于不同来源的微囊泡标记，对微囊泡的不会有太多损伤。上图展示的是使用Ag2Se @锰量子点对巨型囊泡（MV）进行标记的方法图片引自： Jing-Ya Zhao, Gang Chen, Yi-Ping Gu, et al. Ultrasmall Magnetically Engineered AgSe Quantum Dots for Instant Efficient Labeling and Whole-Body High-Resolution Multimodal Real-Time Tracking of Cell-Derived Microvesicles. Journal of the American Chemical Society 2016 138 (6), 1893-1903产品订购 产品应用 货号 名称 规格 价格/元 促销价/元 外泌体 分离 41202ES30 HieffTM Quick exosome isolation kit（ for Serum/Plasma） 血清/血浆外泌体快速抽提试剂盒 30 mL 2155 1500 41201ES25/50 Hieff™ Quick exosome isolation kit（for Cell Culture Media）细胞培养上清外泌体快速抽提试剂盒 25/50 mL 2155/3855 1500/2700 外泌体 鉴定 41203ES05 Exosome identification kit for Westernblot 外泌体鉴定试剂盒 5 T 3683 3315 外泌体 标记 40725ES10/25 DiO (DiOC18(3)) 细胞膜绿色荧光探针 10 /25 mg 488/988 - 40726ES10 DiI (DiIC18(3)) 细胞膜橙红色荧光探针 10 mg 398 - 40757ES25 DiR Iodide (DiIC18(7)) 细胞膜深红色荧光探针 25 mg 988 - 40758ES25 DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 细胞膜红色荧光探针 25 mg 988 - 40718ES50/60 Celltracker CM-DiI 活细胞示踪剂CM-DiI （红色） 1/2×50μg 425/815 - 40715ES25 CFDA, SE 细胞增殖示踪荧光探针 25mg 1599 - 40719ES50/60 Calcein, AM, Ultrapure Grade 钙黄绿素，超纯级 1/2×50μg 199/369 - 您知悉并同意，丁香通平台展示产品并非为平台自身产品，您发起询价或试用申请后，平台将会把您已提供或按要求提供的相关信息同步提供至所咨询的具体产品商家，由商家为您提供具体产品的价格咨询或产品试用注意事项及相关试用产品或完成相应购买，因此您知悉并授权平台将您的信息进行同步共享。您有权拒绝，但您知悉将无法参加询价或试用活动。